Psaki, là con cả trong gia đình có ba chị em,[7] sinh năm 1978 tại Stamford, Connecticut, cha là nhà trị liệu tâm lý [8] Eileen (née Dolan) Medvey[9] và Dimitrios "James" R. Psaki, một nhà phát triển bất động sản đã nghỉ hưu có ông nội di cư từ Hy Lạp vào năm 1904 và có bà nội là người gốc Ireland. Cha mẹ bà kết hôn năm 1976.[10] Jennifer là người gốc Ba Lan.[11]

Psaki tốt nghiệp trường Trung học Greenwich năm 1996. Năm 2000, bà tốt nghiệp Đại học William & Mary với bằng tiếng Anh và xã hội học.[12] Bà là thành viên của hội nữ sinh Chi Omega.[13] Tại Đại học William & Mary, Psaki là vận động viên bơi ngửa thi đấu cho đội thể thao William & Mary Tribe trong hai năm.[13][14]